Арбидол: эффективность в терапии гриппа и других ОРВИ Механизм действия препарата арбидол

Арбидол: эффективность в терапии гриппа и других ОРВИ. Механизм действия препарата Арбидол

Механизм действия препарата арбидол

Многочисленные и разнонаправленные экспериментальные и клинические исследования показали, что высокая эффективность Арбидола является результатом разнообразия его биологической активности, и обусловлена не только непосредственно вирусспецифическим действием, но и опосредованно — способностью индуцировать интерферон, иммуностимулирующим эффектом, антиоксидантной активностью.

Вирусспецифическое действие арбидола

Вирус гриппа относится к оболочечным РНК–содержащим вирусам. Внутреннюю сторону липидной мембраны выстилает основной структурный белок М. В липидной вирусной мембране имеются ионные каналы, сформированные белком М2, в неё же снаружи погружены два поверхностных гликопротеида вируса гриппа: гемагглютинин (НА) и вирусный фермент нейраминидаза (NА), которые обуславливают исключительную изменчивость вируса гриппа. Внутри вириона находятся 8 сегментов РНК, связанных с белками полимеразного комплекса и белком нуклеокапсида (рис. 2).

Рис. 2
Рис. 2. Строение вируса гриппа

HA — ключевой белок, ответственный за проникновение вируса в клетку. Он взаимодействует со специфическим рецептором клетки — сиаловой кислотой, тем самым обеспечивается связывание вируса с клеткой. NA необходима для эффективного высвобождения новых синтезированных вирионов из клетки. Белок M2 формирует ионные каналы в оболочке вируса и активирует изменения вирусной структуры во время вхождения вируса в клетку.

Репродукция вируса гриппа продолжается в течение 6–8 часов в клетках верхнего и нижнего респираторного тракта и подразделяется на ранние и поздние стадии (рис. 3). К ранним стадиям относится адсорбция вируса на клеточной поверхности и проникновение вируса в клетку.

Рис. 3
Рис. 3. Полный цикл репликации вируса гриппа

Чтобы понять, как действует препарат Арбидол, стоит более подробно остановиться на строении HA и его роли в механизме инфицирования вирусом клетки. Установлено, что HA состоит из двух субъединиц — НА1 и НА2 (рис. 4).

Рис. 4
Рис. 4. Гемагглютинин и его строение: субъединицы НА1 и НА2 и пептид слияния вируса гриппа

HA1 содержит рецепторную зону, которая отвечает за связывание вируса с сиаловыми кислотами рецепторов на поверхности мембраны клетки.

После связывания НА с клеточными рецепторами вирус попадает в эндосомы, где происходит слияние липидной мембраны вируса с мембранами эндосом (рис. 5).

Рис. 5
Рис. 5. Эндоцитоз вируса в клетку респираторного тракта

НА2 содержит пептид слияния — участок, индуцирующий слияние клеточной и вирусной мембран (фузию вируса). При нейтральном рН этот пептид спрятан в стволе молекулы НА, при низком рН в эндосомах молекула НА разворачивается и в ней происходят структурные изменения, пептид высвобождается, и индуцирует слияние липидной мембраны вируса с мембранами эндосом, приводящее к освобождению вирусного генома и началу транскрипции (рис. 6) (14–15).

Рис. 6
Рис. 6. Структура вируса гриппа при нейтральном рН (А) и в кислой среде (B)

Пониженное значение рН в эндосомах активирует ионные каналы, формируемые белком М2, через которые ионы Н+ проникают в вирион, понижая рН уже внутри него и приводя к освобождению рибонуклеопротеида вируса от покрывающего его белка М1 (рис. 7). Противогриппозные препараты адамантанового ряда (амантадин, ремантадин), являясь блокаторами ионных каналов, образуемых вирусным белком М2, ингибируют эту стадию вирусной репродукции.

Рис. 7
Рис. 7. Слияние мембран вируса и эндосомы (фузия) и выход рибонуклеотидов из вириона

К поздним стадиям вирусной репродукции относят первичную и вторичную транскрипцию, трансляцию и сборку вириона на клеточной поверхности, приводящую к образованию зрелых вирусных частиц и дальнейшему освобождению их из клетки (рис. 8). На этих стадиях важную роль играет фермент вируса гриппа нейраминидаза, способствуя высвобождению из клеток вновь образованных вирусных частиц и инфицированию ими новых клеток. Действие этого фермента ингибируют противогриппозные препараты второго поколения занамивир и озельтамивир.

Рис. 8
Рис. 8. Поздние стадии репликации вируса гриппа

Многочисленные исследования, проведенные как в России, так и в ряде зарубежных лабораторий показали, что Арбидол действует на ранних стадиях вирусной репродукции и ингибирует слияние вирусной липидной оболочки с внутриклеточными мембранами, предотвращая проникновение вируса внутрь клетки (рис. 8), но не влияет на вирусную транскрипцию и трансляцию, а также на активность нейраминидазы и адсорбцию вируса (16–19). Вирусспецифической мишенью действия Арбидола в цикле вирусной репродукции является НА вируса гриппа. Арбидол взаимодействует с НА вируса гриппа, увеличивая его стабильность к конформационным изменениям, индуцированным низким рН, и, как следствие, ингибирует процесс слияния липидной оболочки вируса с мембранами эндосом, приводящий к высвобождению вирусного нуклеокапсида и началу транскрипции вирусного генома (рис. 9) (17, 20–22).

Рис. 9
Рис. 9. Процесс фузии:
А — без Арбидола, В — в присутствии Арбидола. Арбидол ингибирует слияние мембран вируса и эндосомы

Таким образом, Арбидол по механизму вирусспецифического действия отличается от применяемых противогриппозных препаратов: блокаторов ионных каналов амантадина и ремантадина и ингибиторов нейраминидазы (NA) занамивира (Реленза) и осельтамивира (Тамифлю).

Противовирусная активность

Противовирусная активность Арбидола® подтверждена в многочисленных исследованиях in vitro и in vivo, выполненных в ведущих научных центрах России, независимых лабораториях США, Великобритании, Австралии, Франции, Китая и других стран (23–28).

Противовирусная активность арбидола в культуре клеток (in vitro) в отношении вирусов гриппа А и В человека

В многочисленных опытах in vitro и in vivo было установлено, что Арбидол обладает широким спектром противовирусной активности. С использованием иммуноферментного анализа (ИФА), модифицированного для тестирования противовирусной активности в культуре клеток, было показано, что Арбидол эффективно подавляет вирусную репродукцию эталонных штаммов всех антигенных подтипов вирусов гриппа А H1N1, H2N2, H3N2, а также вирусов гриппа В человека. Ингибирующие концентрации препарата, подавляющие вирусную репродукцию в культуре клеток на 50 % (ИК50), составляли от 1 до 12,5 мкг/мл и совпадали с ИК50, полученными для Арбидола в исследованиях других авторов (24–25).

Показана эффективность препарата в отношении не только вирусов гриппа А и В, включая сезонные и высокопатогенные подтипы A (H1N1)pdm09 и A (H5N1), но и в отношении ряда других возбудителей ОРВИ (аденовирус, РС–вирус, коронавирус и др.). Для Арбидола показана высокая активность и в отношении ремантадин– и осельтамивир–резистентных штаммов, что позволяет рассматривать его как эффективный препарат для лечения гриппа, вызванного такими штаммами.

В последние годы отмечено, что процент штаммов, резистентных к препаратам адамантанового ряда и ингибитору нейраминидазы озельтамивиру чрезвычайно возрос в мире.

Изучение действия Арбидола на репродукцию эпидемических штаммов, выделенных на территории России и резистентных к химиопрепаратам, отличным от Арбидола по механизму вирусспецифического действия, показало, что препарат ингибирует репродукцию как ремантадин–резистентных, так и озельтамивир–резистентных штаммов вирусов гриппа, причем ИК50 Арбидол в отношении этих вирусов сходны с таковыми для эталонных штаммов вирусов гриппа А и В (табл. 1)

Таблица 1. Противовирусная активность этиотропных химиопрепаратов в отношении вирусов гриппа А и В в культуре клеток MDCK

Вирус ИК50* (мкг/мл)
Арбидол Рибавирин Ремантадин Ингавирин
A /Пуэрто–Рико/8/34 (H1N1) 6 2,0 <5 >300
А/Соломоновы острова/03/06 (H1N1) 6,0 <5,0 1,5 >200
A/Aичи/2/69 (H3N2) 7, 5 1,5 3 >300
А/Сингапур/1/57 (H2N2) 10 <5,0 >20
A /Москва/1/09 (H1N1, озель-тамивир резистентный) 5,0 4,0
A/Владивосток/36/09 (H1N1, озельтамивир резистентный) 5,0 3,0
А /Москва/2/09 (H1N1, озель-тамивир резистентный) 5,0 <5,0 <5 >300
А/Москва/20/09 (H3N2, ремантадин резистентный) 7, 5 <5,0 >20 >300
А/Москва/30/09 (H3N2, ремантадин резистентный) 7, 5 <5,0 >20 >300
В/Ли/40 5
В/Москва/29/08 8,5 <5,0 >20 >300
В/Москва/79/08 5,5 <5,0 >20 >300

* — Каждое значение ИК50 представляет собой среднее арифметическое, вычисленное из трех независимых опытов, в каждом из которых для одной точки использовали четыре лунки планшета.

Противовирусная активность арбидола в отношении пандемического штамма 2009 H1N1 вируса гриппа

В апреле–мае 2009 г. в США и Мексике были зафиксированы вспышки гриппа у людей, вызванные вирусом А (H1N1), получившим сначала название «свиной» или «калифорнийский» грипп. Молекулярно–генетические исследования показали, что он представляет новый вирус с уникальной комбинацией генов, происходящий от свиных, птичьих и человеческих штаммов вирусов гриппа А, и легко передается от человека к человеку. Летом 2009 года ВОЗ объявила о начале первой в этом веке пандемии гриппа. К особенностям нового пандемического варианта следует отнести, во–первых, место возникновения (Мексика, а не Китай, как это было с пандемиями XX века (30); во–вторых, — исходную резистентность к адамантановым производным, ремантадину и амантадину, связанную с мутацией S31N в каналообразующем вирусном белке М2 (12); в–третьих, высокий риск стремительного развития тяжёлых пневмоний, особенно у пациентов с отягощённым анамнезом (31). В начале пандемии до тех пор, пока новая вакцина к данному вирусу не стала доступной для широкого использования в клинической практике, этиотропные противогриппозные препараты были единственным средством для эффективной борьбы с распространением вируса. В постпандемический период наряду с вакцинацией противовирусные препараты продолжают также играть значительную роль. Они рекомендованы для лечения гриппа, протекающего в тяжелой форме и для профилактики осложненного течения болезни у пациентов, относящихся к группам риска по осложнениям при гриппе.

При этом первые рекомендации для лечения и профилактики гриппа, вызванного новым пандемическим вирусом гриппа 2009 А (H1N1) как в мире, так и в России, были даны на основе экспериментального изучения его чувствительности к химиопрепаратам.

Оказалось, что вирус гриппа типа А (H1N1) является устойчивым к действию противовирусных препаратов адамантанового ряда амантадину и ремантадину, но чувствителен к ингибиторам нейраминидазы озельтамивиру (Тамифлю) и занамивиру (Реленза) (12). Изучение чувствительности пандемического вируса к Арбидолу в культуре клеток, а также на основании молекулярно-генетического анализа, было проведено в нескольких ведущих вирусологических лабораториях России и мира.

В исследованиях были использованы вирусы гриппа А/California/04/2009, А/California/07/2009, полученные в качестве референс–штаммов из Центра по контролю заболеваемости (США, Атланта), и А/Москва/01/2009swl, выделенные от первого инфицированного новым вирусом Н1N1 пациента, прибывшего в Россию из США. Оказалось, что Арбидол эффективно подавлял размножение всех трех изученных вирусов, при этом ИК50 Арбидола для двух вирусов А/California/07/2009 и А/Moscow/01/2009swl были примерно одинаковы и составляли около 4 мкг/мл (табл. 2). ИК50 Арбидола в отношении вируса А/California/07/2009 (H1N1), определенная методом оценки цитопатической реакции с помощью МТТ, составила 5,6±1,36 мкг/мл, что близко к ИК50, полученным методом ИФА (32–33).

Таблица 2. Чувствительность различных штаммов пандемического вируса гриппа 2009 Н1N1 к противовирусным препаратам

Вирус Рибавирин Ремантадин Арбидол
ИК50* (мкг/мл) ИК50* (мкг/мл) Наличие мутаций в М2 белке ИК50* (мкг/мл) Наличие мутаций в НА
А/California/07/2009 2,0 >5 Есть 4,0 Нет
А/California/04/2009 1,5 >5 Есть 4,0 Нет
А/Moscow/01/2009swl 1,5 >5 Есть 4,0 Нет

* — ИК50 ингибирующие концентрации препарата, подавляющие вирусную репродукцию в культуре клеток на 50 %

В конце 2009 г. в организме умерших больных стали обнаруживаться варианты вируса с мутациями в рецептор-связывающем сайте НА1 в положении 222 D на G. Полученные ранее данные свидетельствуют о приобретении вирусом в результате этой мутации специфичности к рецепторам клеток не только верхних дыхательных путей (как у сезонного вируса гриппа), но и тропности к эпителию нижних дыхательных путей, что в свою очередь приводит к развитию первичной вирусной пневмонии. Это обуславливает тяжелое течение гриппозной инфекции и нередко приводит к смертельному исходу. Оказалось, что Арбидол подавляет размножение таких вирусов, выделенных у пациентов в России, причем активность этого препарата в отношении вирусов с мутацией была одинакова с его активностью в отношении штаммов Н1N1 без данной мутации, а также других эталонных и эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В человека (34).

Противовирусная активность арбидола в культуре клеток в отношении вирусов гриппа, имеющих птичье происхождение

В последние годы эпидемическая ситуация по гриппу осложнилась случаями инфицирования людей вирусами гриппа птиц, которые могут играть существенную роль в формировании нового пандемического штамма вируса гриппа А. С 1997 г. в странах Южной и Юго–Восточной Азии наблюдались эпизоотии среди кур, вызванные вирусами H5N1, сопровождавшиеся заболеванием людей, подчас с высокой смертностью. По данным ВОЗ, вирусом H5N1 заразились более 600 человек в 15 странах мира, при этом примерно в половине случаев с летальным исходом. Большинство случаев заражения проходило при прямом контакте с инфицированными птицами. Ущерб от эпидемии только в странах Юго-Восточной Азии превысил 10 млрд. долларов.

В конце 2005 г. — начале 2006 г. в 6 странах Евросоюза, а также в России и сопредельных с ней государствах наблюдалось распространение гриппа среди птиц, вызванного патогенным вирусом H5N1. Пока заражение людей происходит только при контакте с домашней птицей, однако опасность преодоления межвидового барьера и приобретения эпидемического потенциала отдельными вариантами высокопатогенных вирусов гриппа А H5N1 или их реассортантами остаётся достаточно высокой и требует постоянного эколого-вирусологического мониторинга. В связи с этим получение данных об активности противогриппозных препаратов в отношении этих вирусов крайне важно.

Изучение действия Арбидола на репродукцию вирусов Н5N1 показало, что в клетках MDCK препарат подавлял репродукцию двух патогенных вирусов гриппа: А/Гонконг/156/97 (Н5N1) и А/Цесарка/Гонконг/G1/97 (H9N2), вызвавших заболевания у людей в Гонконге, причем ИК50 в отношении этих вирусов составляли 30 мкг/мл и 15 мкг/мл, соответственно (табл. 3).

Таблица 3. Противовирусная активность Арбидола в отношении вирусов гриппа птиц А подтипов Н2, Н5, Н6 и Н9 в культуре клеток MDCK

Вирус ИК50* (мкг/мл)
А/Гонконг/157/97 (H5N1) 30 ± 5
А/Цесарка/Гонконг/G1/97 (H9N2) 15 ± 3
А/Утка/Гонконг/W31297 (H6N1) 25 ± 3
А/Курица/Гонконг/G9/97 (H9N2) 15 ± 5
A/Утка/Приморье/2633/01 (H5N3) 4,5 ± 2,5
A/Утка/Приморье/2621/01 (H5N2) 4,0 ± 1
A/Утка/Алтай/1285/91 (H5N3) 7,5 ± 2,5
A/Cингапур/1/57 (H2N2) 7,5 ± 4
A/Grebe/Tyva06–1/06 10
A/Chicken/Moscow/2/07 11,1
A/Gygnus gygnus/Krasnodar/329/07 9,8
A/Chicken/Krasnodar/300/07 10,1
A/Pigeon/Rostov-on-Don/6/07 12,5
A/Chicken/Rostov-on-Don/35/07 12,8
A/Chicken/Primorje/1/08 13,0
A/Tyva/2/2010 13,9

* — Каждое значение ИК50 представляет собой среднее арифметическое, вычисленное из трех независимых опытов, в каждом из которых для одной точки использовали четыре лунки планшета.

Арбидол в культуре клеток MDCK также оказывал селективное ингибирующее действие на репродукцию вирусов гриппа А подтипа Н5, изолированных у диких птиц на территории России, антигенная и первичная структура НА которых была сходна с таковой у вирусов, обусловивших вспышки заболевания среди людей и кур в странах Юго–Восточной Азии. Арбидол в концентрации 10 мкг/мл подавлял инфекционный титр данных вирусов в культуре клеток в среднем на 2–3 lg и эффективно ингибировал экспрессию вирусных антигенов, выявляемую методом ИФА. Активность Арбидола в отношении этих вирусов (ИК50 от 4,5 до 7,5 мкг/мл) была сходна с активностью Арбидола в отношении антигенных серотипов вируса гриппа А человека (табл. 3). Кроме того, Арбидол подавлял репликацию высокопатогенных вирусов гриппа Н5N1, выделенных от больных птиц на территории России, при этом, как и в случае с выделенными от инфицированных людей вирусами гриппа Н5N1, ИК50 Арбидола были несколько выше, чем их ИК50, полученные для непатогенных вирусов гриппа подтипа Н5N1, выделенных от диких птиц на территории России, а также эпидемических и эталонных штаммов вируса гриппа А и В человека (34–36).

Полученные результаты показывают, что для достижения в культуре клеток ингибирующего эффекта в отношении высокопатогенных вирусов гриппа Н5N1, выделенных как от больных людей, так и больных птиц, сходного с эффектом, оказываемым Арбидолом на репродукцию вирусов гриппа А и В человека, требовались большие концентрации Арбидола, что совпадало с данными о более высоких концентрациях других противогриппозных препаратов, в частности озельтамивира, необходимых для подавления репродукции патогенных вирусов, имеющих птичье происхождение (табл. 4). Фармакокинетические исследования показали, что концентрация Арбидола зависит от дозы, при этом одноразовая терапевтическая доза составляет 200 мг, а токсикологические исследования показали безопасность и хорошую переносимость препарата при одноразовом приеме 400 мг. (94). Таким образом, возможно увеличение дозы препарата для усиления его эффекта на вирусную репродукцию.

Таблица 4. ИК50* для химиопрепаратов в отношении вирусов гриппа H1N1 sw1

Вирус ИК50* (мкг/мл)
Ремантадин Арбидол Рибавирин Озельтамивир
A/Calif/07/09 не ингибирует 7, 5 10,8 Н. И.
A/IIV–Elista/ 64/2009 не ингибирует 6,6 Н. И.** 0,1
A/IIV–Vladivostok/ 59/2009 не ингибирует 6,7 Н. И. 0,08
A/IIV–Khabarovsk/ 149/2009 не ингибирует 3,2 Н. И. 0,2
A/IIV–Anadyr/ 177/2009 не ингибирует 7,7 Н. И. 1,1

* — ИК50 ингибирующие концентрации препарата, подавляющие вирусную репродукцию в культуре клеток на 50 %
** — Н. И. — не изучали

Противовирусная активность арбидола в культуре клеток в отношении возбудителей ОРВИ

При оценке эффективности противовирусного препарата очень важной является широта спектра его активности. Изучение действия Арбидола в культуре клеток показало, что он подавляет размножение респираторно-синцитиального вируса, риновирусов, парагриппа, ротавирусов, коронавирусов (ТОРС) и аденовируса в культуре клеток, причем ИК50 Арбидола для этих вирусов сходны с таковыми для вируса гриппа А и В (табл. 5). Данные о противовирусной активности Арбидола в отношении возбудителей ряда ОРВИ совпадают с данными как отечественных, так и зарубежных исследователей (25, 26, 37, 38).

Таблица 5. Противовирусная активность Арбидола в отношении вирусов, вызывающих ОРВИ в культурах клеток

Вирус ИК50* (мкг/мл)
Респираторно–синцитиальный вирус 10
Аденовирус тип 5 20
Вирус парагриппа 5
Ротавирус 20
Риновирус тип 30 12,5
Коронавирус штамм 229 Е 6,5

Отмечено, что на протяжении последних лет до 2009 г. отмечалась тенденция роста заболеваемости ОРВИ при уменьшении роста заболеваемости собственно гриппом. В настоящее время не существует эффективных вакцин для профилактики ОРВИ за исключением вакцин против гриппа А и В, поэтому применение противовирусных препаратов для лечения ОРВИ приобретает первостепенное значение. Симптомы острых респираторных вирусных заболеваний сходны, а лабораторная диагностика их на практике еще не получила широкого распространения. Однако применяемые в настоящее время для лечения этих инфекций противовирусные препараты обладают довольно узким спектром действия. Противогриппозные препараты адамантанового ряда амантадин и ремантадин эффективны только в отношении вируса гриппа А, занамивир и озельтамивир разрабатывались как ингибиторы активного сайта нейраминидазы вирусов гриппа А и В и, соответственно, являются высокоселективными ингибиторами репродукции только вирусов гриппа А и В. Таким образом, важнейшим преимуществом Арбидола перед существующими противогриппозными препаратами адамантанового ряда и ингибиторами нейраминидазы является то, что он обладает более широким спектром действия, и эффективен не только в отношении вирусов гриппа А и В, но также и в отношении целого ряда возбудителей других ОРВИ. Широкий спектр действия Арбидола в отношении возбудителей инфекций, имеющих одинаковые симптомы, позволяет рассматривать его как препарат, лечение которым можно начинать без проведения предварительной диагностики.

Противовирусная активность арбидола у животных

Данные об активности Арбидола в отношении вирусов гриппа подтипа Н5N1 в культуре клеток получили подтверждение в экспериментах на мышах. Лечение Арбидолом перорально (10 и 30 мг/кг/день) в течение 5 дней полностью защищало от гибели мышей, зараженных патогенным вирусом гриппа птиц А/Курица/Курган/2005 (H5N1), выделенным во время вспышки гриппа у кур в России (данные Центра вирусологии МО России, досье компании Фармстандарт).

Изучение эффективности Арбидола на модели гриппозной пневмонии мышей показало, что при интраназальном заражении белых мышей адаптированными к нему вирусами гриппа А/Пуэрто-Рико/8/34 (Н1N1) и А/Аичи/2/69 (H3N2) и 5-дневном лечении Арбидолом в дозах от 15 мкг/кг до 100 мг/кг у животных был отмечен терапевтический эффект, который обеспечивал снижение летальности инфицированных мышей на 40–60 %, увеличивая их продолжительность жизни в 1,7–2 раза и предотвращая потерю массы тела по сравнению с группой вирусного контроля. Эффективность Арбидола в этих опытах была сходна с эффективностью ремантадина (табл. 6).

Таблица 6. Терапевтическая эффективность химиопрепаратов на модели гриппозной инфекции у мышей

Препарат 10ЛД50* ЛД80*
Показатель защиты
от летального исхода (%)
Средняя продолжительность
жизни (дни)
Показатель защиты
от летального исхода (%)
Средняя продолжительность
жизни (дни)
Арбидол 15 мг/кг/день 20 8,1 ±3,1 40 11,5±4,8
30 мг/кг/день 10 7,5±2,0 60 13,7±3,1
60 мг/кг/день 50** 10,6±4,5 50 13,1±2,9
100 мг/кг/день не изучали не изучали 50 13,1 ±2,9
Ингавирин 5 мг/кг/день 10 6,4±3,5 30 10,2±3,1
15 мг/кг/день 0 7,0±2,0 30 10,5±4,5
30 мг/кг/день 30 9,3±2,0 не изучали не изучали
60 мг/кг/день 30 8,7±4,3 30 10,4±4,8
Ремантадин 10 мг/кг/день 40*** 9,5±4,6 60 13,6±4,7
Вирусный контроль* 6,1 ±1,8 6,9±1,3

* — В опытах при заражении мышей дозой вируса 10 ЛД50 смертность в группе вирусного контроля составляла 100 %, при заражении 1 ЛД80 — 80 %;
** — р<0,01 в сравнении с контролем вируса в этом же эксперименте;
***— р<0,05 в сравнении с контролем вируса в этом же эксперименте.

Профилактическая эффективность Арбидола на этой же модели была наиболее выражена при использовании его за 96 часов до инфицирования, предотвращая смертность 40–50 % животных и потерю их веса, увеличивая продолжительность их жизни в 1,3–1,5 раза. Арбидол, также как и ремантадин, был более эффективен при лечебном и лечебнопрофилактическом использовании. В дозах 30 и 10 мг/кг/день Арбидол и ремантадин соответственно защищали от гибели 60–80 % инфицированных животных, полностью предотвращали потерю их веса и увеличивали среднюю продолжительность жизни почти в 2 раза (24).

Препарат обладает широким спектром противовирусной активности, ингибируя репродукцию трех основных антигенных подтипов H1N1, H2N2, H3N2 и ремантадин-резистентных вирусов гриппа А человека, вирусов гриппа А птиц Н5 и Н9, вызывавших заболевания людей и птиц, вирусов гриппа В и С, а также респираторно–синцитиального вируса, парагриппа, ротавирусов, коронавирусов (ТОРС) и аденовируса в культуре клеток. Данные о широком спектре действия Арбидола были подтверждены в его клинических испытаниях.

Резистентность

Обратной стороной высокой специфичности всех этиотропных химиопрепаратов является возможность формирования резистентности, то есть устойчивости к препаратам. Быстрое возникновение (через 1–2 пассажа) резистентных к амантадину и ремантадину штаммов было показано в многочисленных экспериментах на животных и в культуре клеток, а появление устойчивых штаммов в человеческой популяции может происходить уже через 2–4 дня после начала лечения этими препаратами. Последние исследования клинических изолятов показали, что процент штаммов вируса гриппа А, резистентных к препаратам адамантанового ряда, чрезвычайно возрос в мире за последние 2–3 года и достигает 90 % в некоторых странах, например в Китае и США. Высокая частота резистентности к амантадину/ремантадину стала причиной запрета их применения для лечения и профилактики гриппа А в США в эпидемическом сезоне 2005– 2007 гг. Новый пандемический вирус H1N1 (2009) также является резистентным к препаратам адамантанового ряда.

Считалось, что частота возникновения резистентных штаммов при приеме озельтамивира составляет 1,3 % у взрослых и 8,6 % у детей. Однако, с начала 2008 г. наблюдалось увеличение среди циркулирующих вирусов гриппа А подтипа Н1N1 штаммов, резистентных к озельтамивиру, достигая в некоторых странах, например, в США около 100 %. В России с февраля 2008 среди циркулирующих штаммов Н1N1 также было обнаружено 40–50 % штаммов, резистентных к озельтамивиру.

Таким образом, развитие резистентности к противовирусным препаратам — одна из важнейших проблем противовирусной химиотерапии. Факты увеличения роста резистентных к какому-либо противовирусному препарату штаммов ставит вопрос о целесообразности его применения для лечения и профилактики гриппа вообще. Это диктует необходимость постоянного мониторинга чувствительности эпидемических штаммов вирусов гриппа к химиопрепаратам и в случае необходимости своевременной замены одного препарата на другой.

Мутанты, резистентные к Арбидолу, получены пока только в опытах путем многократных (около 15) пассажей в культуре клеток в присутствии увеличивающихся концентраций Арбидола. Определение нуклеотидной последовательности Арбидол-резистентных мутантов показало, что резистентность к нему обусловлена мутациями в белке мишени в цепи НА2 в различных положениях (17) (рис. 10).

Рис. 10
Рис. 10. Локализация в молекуле НА мутаций, ответственных за резистентность к Арбидолу (17)

Исследования свыше 500 клинических изолятов, выделенных в России в эпидемический сезон 2000–2008 гг., проведенные в ГУ НИИ вирусологии им. Ивановского РАМН, не выявили среди них ни одного резистентного к Арбидолу, в то время как 40 % из них были резистентны к ремантадину. Однако, эпидемические штаммы вирусов гриппа эталонного варианта В/Гонконг/330/1 и всех изученных вирусов гриппа А, в том числе, резистентных к ремантадину, были более чувствительны к Арбидолу, чем эпидемические штаммы вируса гриппа В эталонного варианта В/Шанхай361/02. Таким образом, несмотря на то, что Арбидол широко используется в России, до настоящего времени Арбидол– резистентные штаммы у людей не были обнаружены (29).

Кроме того, было проведено изучение возможности формирования резистентности к Арбидолу при использовании в клинической практике среди 39 пациентов с симптомами гриппа, которые принимали Арбидол в течение 5 дней. Вирусы, выделенные из носовых смывов пациентов до начала лечения и затем ежедневно в течение лечения, были изучены в отношении их чувствительности к Арбидолу в культуре клеток. Все выделенные изоляты были чувствительны к действию Арбидола, значения ингибирующих концентраций для них колебались в небольшом диапазоне от 2 мкг/мл до 15 мкг/мл и совпадали с ингибирующими концентрациями, полученными нами ранее при изучении чувствительности к Арбидолу эталонных лабораторных штаммов вирусов гриппа А и В. Изучение вирусных изолятов, выделенных от 5 пациентов, у которых нам удалось выделить вирусы в течение 4 и 5 дней приема Арбидола, не выявило снижения чувствительности к Арбидолу на фоне всего курса лечения, а определение их нуклеотидной последовательности генов показало их идентичность и отсутствие мутаций, которые определяются как ответственные за резистентность к Арбидолу в опытах in vitro (табл. 7).

Таблица 7. Чувствительность к Арбидолу изолятов вирусов гриппа, выделенных от пациентов, принимавших препарат

Пациент Номер изолята
и день получения смыва
ИК50*(мкг/мл)Арбидола Наличие мутаций в HA
мальчик, 12 лет
В/Москва/ 9/05
51 — до приема 6,0
53 — 2 день 6,5 нет мутаций
54 — 3 день 5,5 нет мутаций
64 — 4 день 7, 2 5 нет мутаций
65 — 5 день 7, 2 5 нет мутаций
девочка, 5 лeт
В/Москва/ 71/05
179 — до приема 8,0
180 — 2 день 6,5 нет мутаций
181 — 3 день 12,25 нет мутаций
182 — 4 день 10 нет мутаций
подросток, 14 лет
А/Москва/ 8/06 (H1N1)
253 — до приема 5,5
478 — 2 день 5,0 нет мутаций
479 — 3 день 5,4 нет мутаций
480 — 4 день 6,5 нет мутаций
мальчик, 7 лет
А/Москва/ 20/06 (H1N1)
256 — до приема 7,5
489 — 3 день 7,5 нет мутаций
490 — 4 день 9,0 нет мутаций

* — ИК50 ингибирующие концентрации препарата, подавляющие вирусную репродукцию в культуре клеток на 50 %

Таким образом, в настоящее время среди циркулирующих на территории России штаммов вирусов гриппа не выявлено резистентных к Арбидолу. Кроме того, в клиническом исследовании, проведенном среди 39 пациентов, инфицированных вирусами гриппа А и В, не выявлено формирования резистентности к Арбидолу на фоне 5 дневного курса лечения препаратом.

Резистентность к препарату обусловлена мутациями в том вирусном белке, который является мишенью действия препарата. Известно, что препараты адамантанового ряда являются блокаторами белка М 2, и резистентность к ним обусловлена мутациями в позициях 26, 27, 30, 31 или 34 мишени белка М2. Занамивир и озельтамивир являются ингибиторами вирусного фермента нейраминидазы, резистентность к ним обусловлена наличием мутаций в ее активном сайте. Анализ нуклеотидной последовательности штаммов А/California/07/2009, A/California/04/2009 и А/ Moscow/01/2009swl показал, что нейраминидаза этих штаммов, кодируемая сегментом NA, не содержит характерных мутаций (E–119, H–274, R–293, N–295), обуславливающих резистентность вируса к ее ингибиторам озельтамивиру и занамивиру.

Как следует из нуклеотидной последовательности изученных штаммов, в них присутствует одна определяющая мутация в положении 31 белка М2 (серин, замененный на аспаргин), что подтверждает полученные в других исследованиях, а также нами данные об устойчивости в культуре клеток этих вирусов к ремантадину. Изучение механизма действия Арбидола показало, что его мишенью является НА вируса гриппа, и резистентность к нему обусловлена мутациями в положениях K51N, Q42H, Q27N, K117R eго субъединицы HA2. Анализ генома вирусов гриппа Н1N1 показал, что в вирусах H1N1 А/California/07/2009, A/California/04/2009 и А/ Moscow/01/2009swl нет замен, ответственных за резистентность к Арбидолу, что совпадает с полученными данными об активности этого препарата в культуре клеток (32, 39).

Таким образом, результаты экспериментов показали, что Арбидол эффективен в отношении нового пандемического 2009 H1N1 вируса гриппа А. Арбидол оказывает селективное ингибирующее действие на репродукцию пандемического вируса гриппа в культуре клеток MDCK, а при анализе генома вирусов гриппа не было обнаружено замен, определяющих резистентность к Арбидолу. На основании совокупности полученных экспериментальных данных, Арбидол был рекомендован Министерством здравоохранения и социального развития Российской Федерации для профилактики и лечения гриппа, вызванного новым пандемическим 2009 вирусом гриппа А H1N1 (методические рекомендации «Схемы лечения и профилактики гриппа, вызванного вирусом типа A H1N1 для взрослых» от 17 июня 2009 года).

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!:


Обращаем ваше внимание на то, что данный интернет-сайт носит исключительно информационный характер и ни при каких условиях не является публичной офертой, определяемой положениями Статьи 437 (2) Гражданского кодекса Российской Федерации.